發布時間:2005-04-21
來源:中國食用菌商務網
1主題內容與適用范圍
本標準規定了市售銀耳的衛生要求。
本標準適用于人工合成料栽培銀耳、人工段木栽培銀耳和野生銀耳。銀耳制品和鮮銀耳亦可參照此標準。
2引用標準
GB5009.11食品中總砷的測定方法
GB5009.12食品中鉛的測定方法
GB5009.17食品中總汞的測定方法
3感官指標
感官指標見表1。
項目指標
外形色澤氣味
干成品朵形完整。合成料栽培葉片白色或淺黃色,應具有銀耳正常
銀耳直徑≥3cm;段木表面有光澤,耳基芳香氣味,無異
栽培銀耳直徑≥lcm部呈米黃色或橙色,味、異嗅
無霉點,霉斑
干成品浸泡(40℃,30min)朵形
完整,直徑明顯增大,
葉片應完全展開或基本
展開,邊緣整齊,有彈
性,無發粘,軟塌現象
4理化指標
理化指標見表2
項目指標,mg/kg
米酵菌酸0.25
鉛(以Pb計)2.0
砷(以As計)1.5
汞(以Hg計)0.6
5檢驗方法
5.1米酵酸菌[bongkrekicacid(BA),即酵米面黃桿菌毒索A(flavotoxinA)〕是由椰毒假單胞菌(pseudomanascocovenenans)產生的一種可以引起食物中毒的毒素。系統命名為:3-羧甲基-17-甲氧基-6,18,21-三甲基-甘二碳-2,4,8,12,14,18,20-七烯二酸、結構式為:
5.1.1薄層色譜測定法
5.1.1.1原理
樣品中的米酵菌酸經提取、凈化及濃縮后,根據其在短波紫外光GF254硅膠薄層色譜上顯示黑色點的最低檢出量測定含量。
5.1.1.2儀器
a.層析槽(內徑長×寬×高,cm:25×6×4)
b.GF254娃膠薄層(50mm×200mm×0.3mm),自制,經110一115℃活化2?3h,置干燥器中可保存一周;
c.紫外線燈(波長254nm);
d.紫外分光光度計。
5.1.1.3試劑
本標準所用的試劑除特殊規定外,均為分析純,水為蒸餾水或同等純度的水,溶液為水溶液。
a.硅膠GF254層析用;
b.薄層色譜展開劑:石佃醚-無水乙醚-冰乙酸[60十40十l.5(v十v)〕;
c.米酵菌酸標準溶液:稱取米酵菌酸標準品,用甲醇配制成每毫升含有米酵茵酸20μg作測定用,置于4℃冰箱中避光保存;
d.甲醛;
e.冰乙酸;
f.石油醚,沸程30?60℃;
g.無水乙醚;
h.三氯甲烷;
i.85g/100mL磷酸;
j.4%(V/V)碳酸氫鈉水溶液;
k.6mol/L鹽酸。
5.1.1.4操作方法
5.1.1.4.1米酵菌酸的提取
干銀耳樣品經粉碎過40目篩后,稱取20g,置具塞錐形瓶中,加入甲醇20mL,于室溫中避光浸泡lh,然后再加入三氯甲烷80mL和85g/100mL磷酸0.2mL,鮮銀耳樣品經剪碎、磨細及混勻后稱取10g,加入甲醇16mL于室溫中避光浸泡lh,然后再加入三氯甲烷64mL和85g/100mL的磷酸0.16mL;振蕩30min,過濾,干銀耳取濾液50mL,鮮銀耳取濾液40mL。
將以上濾液移入分液漏斗中,加入與濾液體積相同的4%(V/V)碳酸氫鈉水溶液,振搖2min,靜置分層,用帶自動控制球吸管吸出上層于另一分液漏斗中,再用4%(V/V)碳酸氫鈉水溶液重復提取兩次,每次10mL,輕搖,靜置,將三次碳酸氫鈉水層合并,加入三氯甲烷25mL,振搖2min,靜置分層后棄去三氯甲烷層,于分液漏斗中慢慢滴入6mol/L鹽酸以調該溶液PH至2?3,加入石油醚(沸程30?60℃)50mL(鮮銀耳樣品加40mL),振搖3min,靜置分層,取出石油醚層于梨形瓶中,再重復用石油醚30mL和20mL各提取一次(鮮銀耳樣品兩次均為20mL),將石油醚層并人同一瓶中,于40℃水浴中減壓吹氣濃縮至干,用甲醛移至帶lmL刻度的濃縮管中,于40℃用減壓法濃縮至0.2mL以下,并用少許甲醇洗管壁,繼續濃縮至干,加甲醛0.125mL,將干物質溶解,混勻,作為樣液以供薄層色譜測定用。
5.1.1.4.2薄層色譜測定
以薄層板的短邊為底邊,距底邊3cm的基線上用微量注射器滴加20ug/mL標準液8μL與10μL兩個點,以及樣液兩個點,每點10μL(鮮銀耳樣品滴加20μL),在樣液的一個點上再滴加20μg/mL標準液10μL。用展開劑展開16cm,取出揮干。在254nm紫外燈光下觀察結果如下:(1)標準點應出現黑色點;(2)如樣液點在標準點相應位置上未出現黑色點,則樣品中米酵菌酸的含量在測定方法靈敏度0.25ppm以下;如在相應位置上有黑色點,而另一點中樣液與標準液點重疊,則為陽性,根據樣液黑點的強度估計減少滴加微升數,或經稀釋后再滴人不同微升數,直至樣液與標準色點的強度與面積一致為止。米酵菌酸的比移值為0.22。
5.1.1.4.3計算
V11
X1=0.2?------?D?----…………………(1)
V2m1
式中:X1?米酵菌酸含量,μg/g;
0.2??米酵菌酸的最低檢出量,μg;
V1?加入甲醇溶解的體積,mL;
V2?出現最低檢出量時滴加樣液的體積,mL;
D??樣液的總稀釋倍數;
m1?甲醇溶解時相當樣品的質量,g。
5.1.1.4.4確證試驗
對含量高的樣品可以進一步作確證試驗;將剩余的陽性樣液與空白甲醇液分別經薄層分離后,刮下并收集與米酵菌酸標準相應的色譜帶與空白處硅膠。各加甲醇4mL,于室溫中浸泡l一2h,混勻,離心,吸出上清液,以空白硅膠甲醇洗脫液作對照,用紫外分光光度計測定,應在267nm和236nm處有米酵菌酸的兩個最高吸收峰。
5.1.2高壓液相色譜測定法
5.1.2.1原理
樣品中的米酵菌酸經提取、凈化及濃縮后,根據在高壓液相色譜上的出峰面積測定含量。
5.1.2.2試劑
a.高壓液相色譜洗脫劑:甲醇-水-冰乙酸[75十27十1.7(V/V),在配制前,所用試劑及水均需分別重蒸餾。
b.其他試劑同5.1.1.3c、d、e、I、g、h、i、j、k。
5.1.2.3儀器
a.高壓液相色譜儀;
b.20μL樣品環;
c.分光光度檢定器,調波長至267nm;
d.求積儀;
e、防護柱4.6mmID×5cm,內裝C?18硅膠,粒度直徑為10μm;
f.分析柱AltexUltrasphereTM?ODS,粒度直徑為u5m,4.6mmID×25cm。
5.1.2.4操作方法
5.1.2.4.1米酵菌酸的提取
同5.1.1.4.1,但最后不用甲醇轉移,直接于瓶內加入甲醇0.5mL,將干物質溶解,混勾,取出上清液經離心后,置小試管中,作為樣液供高壓液相色譜測定用。
5.1.2.4.2高壓液相色譜測定
高壓液相色譜操作條件:流速1.1mL/min,紙速0.5cm/min,檢定器靈敏度為將10μg/mL標準液20uL調至滿刻度的70%一90%。在作高壓液相色譜時,首先用洗脫液平衡分析柱,從進樣口裝置分別進入不同濃度的標準液與樣液各20uL。在米酵菌酸標準峰面積的直線范圍內。將樣液與標準的峰面積相比以求出樣品中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留時間為17min。
5.1.2.4.3計算
A1
X2=C?----?V?D------……………………(2)
Sm2
式中:X2?米酵菌酸含量,μg/g
C??米酵菌酸標準溶液的濃度,μg/mL;
A??樣液的峰面積;
s??米酵菌酸標準溶液的峰面積;
v??加入甲醇溶解的體積,mL;
D??樣液的總稀釋倍數;
m2?甲醇溶解時相當樣品的質量,g。
5.1.2.4.4確證
如陽性樣品還需用薄層色譜法中樣液與標準液點重疊的方法確證。
5.2鉛的測定
按照GB5009.12執行。
5.3砷的測定
按照GB5009.11執行。
5.4汞的測定
按照GB5009.17執行
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