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GB/T 15673—1995
1 主題內容與適用范圍
   本標準規定了食用菌中粗蛋白質含量的測定方法。
   本標準適用于食用菌中粗蛋白質含量的測定。
2 引用標準
    GB 12530 食用菌取樣方法
    GB 12531 食用菌水分測定
3 方法提要或原理
    采用半微量凱氏定氮法，即在加速劑存在下，以硫酸破壞樣品中有機物，加堿蒸餾，滴定所釋放的氨，計算出其含氮量。含氮量乘上換算系數6.25即得樣品的粗蛋白質量。菇類可消化蛋白質是粗蛋白的70％左右，含氮量乘上4.38，即為可消化蛋白質的含量。
4 試劑
   分析中，除另有說明，均限用分析純試劑、蒸餾水或相當純度的水。
   4.1 硫酸（GB 625）：分析純或化學純，密度1.84g/mL。
   4.2 鹽酸（GB 622）：密度1.18g/mL。
   4.3 氫氧化鈉溶液：濃度400g/L，用分析純或化學純氫氧化鈉（GB 629）配制。 
   4.4 硼酸（GB 628）溶液：濃度20g/L，為蒸餾時的吸收液。
   4.5 加速劑：將600g硫酸鉀（HG 3─920）和100g五水合硫酸銅（GB 665 
CuSO4·5H2O）混勻，充分研磨后過40目篩，試劑瓶內密封保存。
   4.6
鹽酸標準溶液：濃度0.05mol/L或0.1mol/L，用無水碳酸鈉或鄰苯二甲酸氫鉀標定其濃度，精確到小數點后第四位。
   4.7 甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：50mL濃度為2g/L的溴甲酚綠（HG 3─1220）95％乙醇（GB 679）溶液和10mL濃度為2g/L的甲基紅（HG 3─958）95％乙醇溶液混合。

5 儀器、設備
    5.1 電熱鼓風干燥箱。
    5.2 小型植物粉碎機：備有1mm孔徑的金屬篩網。
    5.3 分樣篩：備有孔徑0.42mm（40目）和孔徑0.84mm（20目）篩子。
    5.4 玻璃研缽：備有研杵。
    5.5 廣口瓶：帶磨口。
    5.6 剪刀和小刀。
    5.7 分析天平：感量0.0001g。
    5.8 扭力天平。
    5.9 可調電爐：0～600℃。
    5.10 通風櫥。
    5.11 消煮架：鐵制，可使凱氏瓶在消煮時與垂直方向成30°～45°角。
    5.12 硬質凱氏瓶：容積100mL。
    5.13 半微量凱氏定氮蒸餾裝置。
    5.14 半微量滴定管：10mL。
    5.15 彎頸三角漏斗：直徑25mm。
    5.16 錐形瓶：250mL。
6 樣品
    6.1 取樣方法和數量
    6.1.1 干制品（蘑菇干片、干香菇、黑木耳和銀耳等）按GB 12530 中規定要求進行。總量不得少于100g。
    6.1.2 鮮菇在每批不同的地方隨機取樣作為原始樣品，總量不得少于1000g。 
    6.2 試樣的制備
    6.2.1 干品直接用剪刀剪成小塊，在80～100℃干燥箱中烘至發脆后冷卻，立即用小型植物粉碎機粉碎。棄去開始粉碎出的樣品（約占總樣十分之一）。粉碎過的樣品均需過40目篩。未能過篩部分再次粉碎或經研缽內研磨之后再過篩，直至全部樣品過篩為止。銀耳和木耳樣品因質地關系經粉碎后大部分樣品不能過40目篩，故要求全部樣品過20目篩，過篩后的樣品裝入清潔的廣口瓶內保存備用。樣品密封后填寫標簽，注明品名、日期、交樣單位和取樣人等。
   6.2.2 鮮菇取樣后立即切成4mm厚度的菇片，鮮耳則用手撕成小塊均勻地攤在干燥箱內墊有紗布的鐵絲網上，50℃鼓風干燥6h以上。待樣品半干后再逐步提高溫度至80～100℃。樣品發脆之后冷卻，立即用粉碎機粉碎。其他操作同干品。
7 分析步驟
   7.1稱樣：稱取試樣0.3～0.5g（蘑菇、香菇、草菇和平菇等高蛋白質的樣品為0.3g，木耳、銀耳和茯苓等低蛋白質含量的樣品則為0.5g），精確到0.0001g。同時按GB 12531中規定的方法稱樣測定試樣的含水量。
  7.2 消煮：試樣無損地倒入凱氏瓶中，加入加速劑粉末（4.5）3.5g，混勻，最后加入濃硫酸（4.1）5mL，輕輕搖動凱氏瓶使試樣完全濕潤。消煮時利用消煮架將凱氏瓶斜放在電爐上加熱。瓶口加彎頸三角漏斗。開始時緩慢地加熱，待瓶內硫酸液沸騰后，調節電爐溫度，防止泡沫沖到凱氏瓶頸上。經常旋轉凱氏瓶，直至有機物完全炭化、泡沫消失為止。隨后用猛火加熱，使溶液不斷處于沸騰狀態。溶液變清呈綠色之后繼續加熱0.5h后結束。整個過程在通風櫥內進行。

  7.3 蒸餾：裝好半微量定氮蒸餾裝置。使用前用蒸餾水沖洗干凈。在蒸氣發生瓶內加入2/3～3/4容積的蒸餾水。將冷凝管下端插入盛有10mL硼酸吸收液（4.4）的250mL錐形瓶液面下，吸收液中預先加入5～6滴混合指示劑（4.7）。通電加熱，待蒸氣產生后開始蒸餾。從加樣口將凱氏瓶中消煮好的樣品液倒入，并用蒸餾水沖洗凱氏瓶數次，確保樣品全部加入。立即加入氫氧化鈉溶液（4.3）20mL，使樣品液呈強堿性。加樣 口蓋塞封閉，通入蒸氣，使反應室內蒸餾液猛烈沸騰，釋放出的氨被吸收液所吸收，待吸收液開始變綠色之后繼續蒸餾5～6min，吸收液總量達100mL左右時停止蒸餾。

   7.4 滴定：取出吸收瓶，用鹽酸標準液（4.6）將吸收液由藍綠色滴定至灰紫色為終點。
   7.5   空白試驗：不加試樣的加速劑和濃硫酸作為空白樣品，按上述步驟同時進行測定。空白試驗所消耗的鹽酸標準溶液體積須小于0.25mL。
8 分析結果的計算
    8.1 計算粗蛋白質（干基，％）=〔c（V2-V1）×0.014×6.25〕/〔m（1-X）〕×100 式中：c──鹽酸標準溶液的濃度，mol/L； V1──空白試驗滴定消耗的鹽酸標準溶液體積，mL； V2──樣品滴定消耗的鹽酸標準溶液體積，mL；m──樣品的質量，g；0.014──氮的摩爾質量，g/m mol；X──樣品含水量，％；6.25── 氮換算成粗蛋白質的系數。8.2 允許差取平行測定結果的算術平均值為測定結果，保留小數后一位。平行測定結果的絕對差值不大于0.2％。

編輯：黑子