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目    次
前言 II
1 范圍 1
2 規范性引用文件 1
3 定義 1
4 制作要求 1
5 標志 4
6 貯存 4
 
前    言
本標準由葫蘆島市質量技術監督局提出并歸口；
本標準起草單位：中國農函大食用菌生態培訓科研示范基地、沈陽旭源生物科技有限公司、
葫蘆島農函大玄宇食用菌野馴繁育有限公司、沈陽農業大學食品學院、遼寧農業職業技術學院；
本標準主要起草人：馬世宇、董亞賢、趙春燕、李鴻相、林文飛、王振龍、牛長滿、李春艷、劉艷梅、王宏偉。

 
北蟲草菌種生產技術規程
1　范圍
本標準規定了北蟲草菌種定義，制作要求，質量要求，標志及貯存要求。
本標準適用于北蟲草菌種生產。
2　規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB/T191-2008  外包裝儲運圖示標志
GB/T6388-1986  運輸包裝收發貨標志
NY/T528-2002  食用菌菌種生產技術規程
《食用菌菌種管理辦法》（中華人民共和國農業部第62號令發布
3　定義
本標準采用下列術語和定義。
3.1　
北蟲草菌種
北蟲草生物學分類地位屬子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬、蛹蟲草（Cordyceps militaris ）。它是以中國北方野生蛹蟲草為樣本，采用組織或孢子分離法，經分離、純化、馴化，選育獲得的具有一致性、穩定性、結實性的真菌菌種（Type Culture），經人工培養進一步擴大繁殖以及用于栽培生產的純菌絲培養物，包括固體母種和液體生產種。
3.2　　
固體母種
北蟲草菌種的純菌絲固體培養物及其繼代固體培養物，以玻璃試管為培養容器和使用單位，又稱一級菌種、試管菌種。
3.3　　
液體生產種
由固體母種接種于液體培養基擴繁而來的純菌絲液體培養物，培養容器為玻璃瓶或發酵罐，只用于生產不能用于菌種擴繁。
4　制作要求
4.1　　技術人員
具有生產北蟲草菌種的專業技術人員。
4.2　環境條件
4.2.1　環境衛生
場地要求遠離禽畜設施、垃圾（糞便）場、無污水和其它污染源，通風、透光，地面及四周無灰塵、無飛蟲、無螨類、無老鼠。
4.2.2　設置和布局
按NY/T528中的 4.3規定執行。
4.2.3　設備設施
按NY/T528中的4.4規定執行。
4.3　菌種生產工藝流程
4.3.1　流程順序
培養基配制—→分裝—→滅菌—→冷卻—→接種—→培養—→檢查—→成品
4.3.2　培養原料
用馬玲薯、玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏（粉）、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1等為原料，經配制后做為北蟲草的營養基質。其中，玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉為市售產品，要求無結塊無變質；馬玲薯出芽變綠的不能使用；蛋白胨、酵母膏（粉）為生化試劑；葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂為化學純以上級試劑；瓊脂、維生素B1為食品級以上產品；水為自來水等可飲用水。
4.3.3　培養容器
4.3.3.1　　固體母種生產容器
使用玻璃試管和膠塞，試管規格為18×180mm或20×200mm，試管塞一般采用膠塞，保存時間短直接用于液體生產種的可以使用棉塞，不能使用脫脂棉做試管塞。
4.3.3.2　液體生產種生產容器
使用250ml、500ml玻璃輸液瓶，用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。
4.3.4　培養基配制與分裝
4.3.4.1　固體母種培養基配制與分裝
4.3.4.1.1　固體母種培養基配方
a）馬鈴薯200.0g，葡萄糖20.0g，，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 10.0mg，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。
b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。
4.3.4.1.2　固體母種培養基配制與分裝
按配方稱好各種原料，將馬鈴薯洗凈去皮去芽眼（出芽、變綠禁用），稱取200g，切成3～5mm薄片，加水1000ml，文火煮沸20～30分鐘，用4層紗布過濾，濾液放回鍋內，加入瓊脂充分溶化，再依次加入其它成分，攪拌溶解后，加開水補足至1000ml，趁熱分裝試管，裝量為試管的1/4～1/5，塞入膠塞。
4.3.4.2　液體生產種培養基配制與分裝
4.3.4.2.1　液體生產種培育基配方
 a）馬鈴薯200.0g，蠶蛹粉10.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 50
水1000ml，pH值6.0～7.0。
b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，
水 1000ml，pH值6.0～7.0。
4.3.4.2.2　液體生產種培養基配制與分裝
按配方稱好各種原料，將馬鈴薯去皮去芽眼，稱取200g，切成3～5mm厚的薄片，與蠶蛹粉（或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆粕粉等農產品原料）一起放入鍋中，文火煮沸20～30分鐘，用8層紗布過濾，濾液用開水補足至1000毫升，再依次加入其它成分，攪拌溶解，然后裝入玻璃輸液瓶中，液體裝量不宜超過容器總容積的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。
4.3.5　培養基滅菌與冷卻
4.3.5.1　固體母種培養基滅菌與冷卻
      按NY/T528中的4.7.5規定執行。
4.3.5.2　　液體生產種培養基滅菌與冷卻
采用常壓滅菌或高壓蒸汽滅菌，滅菌方法和規程可參照固體母種培養基滅菌。要點為：高壓蒸汽滅菌0.11MPa 保持30分鐘；常壓滅菌100℃保持6～8小時；高壓蒸汽滅菌一定要等滅菌器的壓力降為零時，才可以開啟滅菌器，取出菌種瓶；菌種瓶冷卻至室溫后方可接種。
4.3.5.3　培養基滅菌效果的檢查
按NY/T528中的4.7.6規定執行。
4.3.6　接種
4.3.6.1　固體母種接種
　接種方法按NY/T528中的4.7.8規定執行。
4.3.6.2　液體生產種接種
在無菌操作條件下，用接種鉤從母種斜面中切取1cm²菌面(可稍帶培養基)放入液體菌種培養瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封扎瓶口，每支母種可接種10～15瓶液體生產種。
4.3.7　菌種培養
4.3.7.1　　培養條件
4.3.7.1.1　菌種培養溫度18～23℃。
4.3.7.1.2　菌種培養濕度60～65%。
4.3.7.1.3　菌種培養光線為黑暗條件。
4.3.7.1.4　 菌種培養空氣為環境清新無異味。
4.3.7.2　 培養時間
4.3.7.2.1　固體母種7～10天可長滿試管。
4.3.7.2.2　 液體生產種的生產，主要采用搖床振蕩培養，震蕩頻率依據搖床性能和菌種性質等進行適當調節，要求培養的菌種菌球密度大、菌絲掛瓶壁少、培養周期短以及接種后定殖能力強、發菌快。一般往復式搖床60～70次/分鐘，旋轉式搖床100～120轉/分鐘，振蕩培養時間為4～6天；沒有設備條件的可采用靜止培養，靜止培養時間為7～10天。
4.3.8　 培養期的檢查
4.3.8.1　 檢查次數
培養期間定期檢查，一般每天檢查2次，及時淘汰染菌或劣勢菌種。
4.3.8.2　質量要求
4.3.8.2.1　固體母種質量要求
固體母種質量要求應符合表１的規定。
表１ 固體母種質量要求 
項　　目 要　　　　　　　求
菌　　絲 菌絲長滿基質斜面，菌苔粉末狀或短絨毛狀，橘黃色或橘紅色，厚薄均勻一致，無明顯白色絨毛狀氣生菌絲；無雜菌；菌苔底部呈黃色
原　　基 母種試管在2～4℃的條件下長時間保存可出現原基
轉代次數 一代母種轉代不超過3次
鏡　　檢 菌絲絲狀，均勻一致，無雜菌

4.3.8.2.2　液體生產種質量要求
液體生產種質量要求應符合表２的規定。

表２  液體生產種質量要求 
項　　目 要　　　　　　　　求
菌　　絲 菌絲絮狀或小球狀，均勻一致，掛瓶壁的菌絲短絨毛狀，淡黃色
雜    質 無任何雜質
培 養 液 菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均勻、無上浮、無沉淀
氣　　味 有北蟲草獨有的菌香味、無異味
鏡　　檢 菌絲直徑與分枝均勻一致，無其它真菌和細菌

5　標志
5.1　合格的菌種必須貼有標簽，應符合GB/T191、GB/T6388的規定。
5.2　標簽應標明廠名、廠址、生產單位、接種日期、保質期、注意事項等。
6　貯存
6.1　固體母種經儲存一段時間后再使用，應進行轉代擴繁和出草試驗。
6.2　液體生產種在2～4℃環境中保質期7～10天。