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目    次
前言 II
1 范圍 1
2 規(guī)范性引用文件 1
3 定義 1
4 制作要求 1
5 標(biāo)志 4
6 貯存 4
 
前    言
本標(biāo)準(zhǔn)由葫蘆島市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口；
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)函大食用菌生態(tài)培訓(xùn)科研示范基地、沈陽旭源生物科技有限公司、
葫蘆島農(nóng)函大玄宇食用菌野馴繁育有限公司、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院、遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院；
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：馬世宇、董亞賢、趙春燕、李鴻相、林文飛、王振龍、牛長滿、李春艷、劉艷梅、王宏偉。

 
北蟲草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程
1　范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了北蟲草菌種定義，制作要求，質(zhì)量要求，標(biāo)志及貯存要求。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于北蟲草菌種生產(chǎn)。
2　規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T191-2008  外包裝儲運圖示標(biāo)志
GB/T6388-1986  運輸包裝收發(fā)貨標(biāo)志
NY/T528-2002  食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程
《食用菌菌種管理辦法》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第62號令發(fā)布
3　定義
本標(biāo)準(zhǔn)采用下列術(shù)語和定義。
3.1　
北蟲草菌種
北蟲草生物學(xué)分類地位屬子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬、蛹蟲草（Cordyceps militaris ）。它是以中國北方野生蛹蟲草為樣本，采用組織或孢子分離法，經(jīng)分離、純化、馴化，選育獲得的具有一致性、穩(wěn)定性、結(jié)實性的真菌菌種（Type Culture），經(jīng)人工培養(yǎng)進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖以及用于栽培生產(chǎn)的純菌絲培養(yǎng)物，包括固體母種和液體生產(chǎn)種。
3.2　　
固體母種
北蟲草菌種的純菌絲固體培養(yǎng)物及其繼代固體培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位，又稱一級菌種、試管菌種。
3.3　　
液體生產(chǎn)種
由固體母種接種于液體培養(yǎng)基擴(kuò)繁而來的純菌絲液體培養(yǎng)物，培養(yǎng)容器為玻璃瓶或發(fā)酵罐，只用于生產(chǎn)不能用于菌種擴(kuò)繁。
4　制作要求
4.1　　技術(shù)人員
具有生產(chǎn)北蟲草菌種的專業(yè)技術(shù)人員。
4.2　環(huán)境條件
4.2.1　環(huán)境衛(wèi)生
場地要求遠(yuǎn)離禽畜設(shè)施、垃圾（糞便）場、無污水和其它污染源，通風(fēng)、透光，地面及四周無灰塵、無飛蟲、無螨類、無老鼠。
4.2.2　設(shè)置和布局
按NY/T528中的 4.3規(guī)定執(zhí)行。
4.2.3　設(shè)備設(shè)施
按NY/T528中的4.4規(guī)定執(zhí)行。
4.3　菌種生產(chǎn)工藝流程
4.3.1　流程順序
培養(yǎng)基配制—→分裝—→滅菌—→冷卻—→接種—→培養(yǎng)—→檢查—→成品
4.3.2　培養(yǎng)原料
用馬玲薯、玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏（粉）、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1等為原料，經(jīng)配制后做為北蟲草的營養(yǎng)基質(zhì)。其中，玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉為市售產(chǎn)品，要求無結(jié)塊無變質(zhì)；馬玲薯出芽變綠的不能使用；蛋白胨、酵母膏（粉）為生化試劑；葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂為化學(xué)純以上級試劑；瓊脂、維生素B1為食品級以上產(chǎn)品；水為自來水等可飲用水。
4.3.3　培養(yǎng)容器
4.3.3.1　　固體母種生產(chǎn)容器
使用玻璃試管和膠塞，試管規(guī)格為18×180mm或20×200mm，試管塞一般采用膠塞，保存時間短直接用于液體生產(chǎn)種的可以使用棉塞，不能使用脫脂棉做試管塞。
4.3.3.2　液體生產(chǎn)種生產(chǎn)容器
使用250ml、500ml玻璃輸液瓶，用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。
4.3.4　培養(yǎng)基配制與分裝
4.3.4.1　固體母種培養(yǎng)基配制與分裝
4.3.4.1.1　固體母種培養(yǎng)基配方
a）馬鈴薯200.0g，葡萄糖20.0g，，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 10.0mg，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。
b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0。
4.3.4.1.2　固體母種培養(yǎng)基配制與分裝
按配方稱好各種原料，將馬鈴薯洗凈去皮去芽眼（出芽、變綠禁用），稱取200g，切成3～5mm薄片，加水1000ml，文火煮沸20～30分鐘，用4層紗布過濾，濾液放回鍋內(nèi)，加入瓊脂充分溶化，再依次加入其它成分，攪拌溶解后，加開水補足至1000ml，趁熱分裝試管，裝量為試管的1/4～1/5，塞入膠塞。
4.3.4.2　液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基配制與分裝
4.3.4.2.1　液體生產(chǎn)種培育基配方
 a）馬鈴薯200.0g，蠶蛹粉10.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 50
水1000ml，pH值6.0～7.0。
b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，
水 1000ml，pH值6.0～7.0。
4.3.4.2.2　液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基配制與分裝
按配方稱好各種原料，將馬鈴薯去皮去芽眼，稱取200g，切成3～5mm厚的薄片，與蠶蛹粉（或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆粕粉等農(nóng)產(chǎn)品原料）一起放入鍋中，文火煮沸20～30分鐘，用8層紗布過濾，濾液用開水補足至1000毫升，再依次加入其它成分，攪拌溶解，然后裝入玻璃輸液瓶中，液體裝量不宜超過容器總?cè)莘e的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。
4.3.5　培養(yǎng)基滅菌與冷卻
4.3.5.1　固體母種培養(yǎng)基滅菌與冷卻
      按NY/T528中的4.7.5規(guī)定執(zhí)行。
4.3.5.2　　液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基滅菌與冷卻
采用常壓滅菌或高壓蒸汽滅菌，滅菌方法和規(guī)程可參照固體母種培養(yǎng)基滅菌。要點為：高壓蒸汽滅菌0.11MPa 保持30分鐘；常壓滅菌100℃保持6～8小時；高壓蒸汽滅菌一定要等滅菌器的壓力降為零時，才可以開啟滅菌器，取出菌種瓶；菌種瓶冷卻至室溫后方可接種。
4.3.5.3　培養(yǎng)基滅菌效果的檢查
按NY/T528中的4.7.6規(guī)定執(zhí)行。
4.3.6　接種
4.3.6.1　固體母種接種
　接種方法按NY/T528中的4.7.8規(guī)定執(zhí)行。
4.3.6.2　液體生產(chǎn)種接種
在無菌操作條件下，用接種鉤從母種斜面中切取1cm²菌面(可稍帶培養(yǎng)基)放入液體菌種培養(yǎng)瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封扎瓶口，每支母種可接種10～15瓶液體生產(chǎn)種。
4.3.7　菌種培養(yǎng)
4.3.7.1　　培養(yǎng)條件
4.3.7.1.1　菌種培養(yǎng)溫度18～23℃。
4.3.7.1.2　菌種培養(yǎng)濕度60～65%。
4.3.7.1.3　菌種培養(yǎng)光線為黑暗條件。
4.3.7.1.4　 菌種培養(yǎng)空氣為環(huán)境清新無異味。
4.3.7.2　 培養(yǎng)時間
4.3.7.2.1　固體母種7～10天可長滿試管。
4.3.7.2.2　 液體生產(chǎn)種的生產(chǎn)，主要采用搖床振蕩培養(yǎng)，震蕩頻率依據(jù)搖床性能和菌種性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，要求培養(yǎng)的菌種菌球密度大、菌絲掛瓶壁少、培養(yǎng)周期短以及接種后定殖能力強、發(fā)菌快。一般往復(fù)式搖床60～70次/分鐘，旋轉(zhuǎn)式搖床100～120轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩培養(yǎng)時間為4～6天；沒有設(shè)備條件的可采用靜止培養(yǎng)，靜止培養(yǎng)時間為7～10天。
4.3.8　 培養(yǎng)期的檢查
4.3.8.1　 檢查次數(shù)
培養(yǎng)期間定期檢查，一般每天檢查2次，及時淘汰染菌或劣勢菌種。
4.3.8.2　質(zhì)量要求
4.3.8.2.1　固體母種質(zhì)量要求
固體母種質(zhì)量要求應(yīng)符合表１的規(guī)定。
表１ 固體母種質(zhì)量要求 
項　　目 要　　　　　　　求
菌　　絲 菌絲長滿基質(zhì)斜面，菌苔粉末狀或短絨毛狀，橘黃色或橘紅色，厚薄均勻一致，無明顯白色絨毛狀氣生菌絲；無雜菌；菌苔底部呈黃色
原　　基 母種試管在2～4℃的條件下長時間保存可出現(xiàn)原基
轉(zhuǎn)代次數(shù) 一代母種轉(zhuǎn)代不超過3次
鏡　　檢 菌絲絲狀，均勻一致，無雜菌

4.3.8.2.2　液體生產(chǎn)種質(zhì)量要求
液體生產(chǎn)種質(zhì)量要求應(yīng)符合表２的規(guī)定。

表２  液體生產(chǎn)種質(zhì)量要求 
項　　目 要　　　　　　　　求
菌　　絲 菌絲絮狀或小球狀，均勻一致，掛瓶壁的菌絲短絨毛狀，淡黃色
雜    質(zhì) 無任何雜質(zhì)
培 養(yǎng) 液 菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均勻、無上浮、無沉淀
氣　　味 有北蟲草獨有的菌香味、無異味
鏡　　檢 菌絲直徑與分枝均勻一致，無其它真菌和細(xì)菌

5　標(biāo)志
5.1　合格的菌種必須貼有標(biāo)簽，應(yīng)符合GB/T191、GB/T6388的規(guī)定。
5.2　標(biāo)簽應(yīng)標(biāo)明廠名、廠址、生產(chǎn)單位、接種日期、保質(zhì)期、注意事項等。
6　貯存
6.1　固體母種經(jīng)儲存一段時間后再使用，應(yīng)進(jìn)行轉(zhuǎn)代擴(kuò)繁和出草試驗。
6.2　液體生產(chǎn)種在2～4℃環(huán)境中保質(zhì)期7～10天。