靈芝的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性成分十分豐富，主要活性成分有多糖、三萜類化合物、蛋白質(zhì)、多肽、核苷類、呋喃類、甾醇、生物堿和氨基酸等。多糖、三萜類化合物和蛋白質(zhì)是靈芝的主要活性成分，靈芝多糖和肽又多以蛋白多糖或糖肽的形式存在。研究表明，靈芝主要活性物質(zhì)具有抗氧化、抗糖尿病、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、降低膽固醇、保肝護腎等活性。
1.多糖類
多糖是靈芝研究最多的活性成分之一，目前已分離出200多種靈芝多糖，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)特性。多糖主要存在于細胞壁中，易溶于水難溶于有機溶劑，常見提取方法有熱水浸提法、堿浸提法、超聲提取法、微波提取法、酶解法等。胡瑞財?shù)仍诹弦罕?∶34.5、84.6℃的條件下浸提林下栽培的靈芝子實體68.3 min，多糖得率可達1.88%。王會賓等用熱水浸提法提取靈芝孢子多糖，響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果表明，在料液比1∶15.8、91℃浸提3.3 h的條件下，多糖得率可達3.69%。Huang 等經(jīng)過優(yōu)化確定堿性提取靈芝子實體多糖的最佳工藝，料液比為1∶21.4、5.1%的NaOH溶液、60.1℃提取77.3 min，總多糖得率8.21%。Ma等采用超聲提取靈芝子實體多糖，最佳提取條件為超聲功率320 W、溫度70℃、時間34 min，此時多糖得率為2.78%。胡靈等采用微波法提取靈芝多糖，結(jié)果表明最佳提取條件為料液比1∶20、提取溫度為90℃、提取功率為400 W、提取時間為20 min，多糖得率達1.15%。Do等采用超聲輔助幾丁質(zhì)酶提取越南赤芝子實體，結(jié)果表明酶濃度為32%、pH值為8.3、提取溫度為5℃、提取時間為5 min、超聲功率為45 W等最佳實驗參數(shù)下，提取液多糖含量可達30.48 mg/g。靈芝粗多糖常混有蛋白質(zhì)、無機鹽、色素等雜質(zhì)，需要選擇合適的方法將多糖與雜質(zhì)分離，以得到純凈的多糖組分。常見純化方法有乙醇分級沉淀法、超濾膜分離法、親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析等。多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，靈芝品系和純化方法的差異會導(dǎo)致純化得到的靈芝多糖的結(jié)構(gòu)存在差異。劉艷芳等采用乙醇沉淀和柱層析法，從靈芝子實體和孢子粉中分離純化得到2種免疫活性不同的β-葡聚糖。Pan等用DEAE-52纖維素柱層析對靈芝多糖FYGL進行梯度洗脫，得到分子質(zhì)量為78 ku的中性多糖FYGL-1，主要成分為半乳糖、鼠李糖和葡萄糖。Huang等采用凝膠過濾層析法分離得到由葡萄糖和半乳糖組成的水溶性中性多糖GLP-F1-500。何晉浙等采用沸水回流法提取靈芝子實體多糖，發(fā)現(xiàn)經(jīng)膜分離得到的100 ku以上的多糖為β-葡聚糖。
2.三萜類
三萜是靈芝另一類主要生物活性成分，其含量可以作為評估靈芝質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，主要包括靈芝酸、赤芝酸、靈芝內(nèi)酯等三萜類化合物，具有抗炎、抗腫瘤、抗HIV和降血脂活性。迄今為止，已經(jīng)從靈芝子實體、孢子和菌絲體中鑒定出200余種三萜類化合物。靈芝三萜多具有脂溶性，易溶于有機試劑難溶于水。提取方法主要有傳統(tǒng)溶劑提取法、超臨界萃取法、酶解法等。傳統(tǒng)提取法操作簡單，多采用醇、氯仿等有機試劑在適宜溫度下提取，存在耗時長、提取率低、有機溶劑殘留等缺點。超臨界CO2法作為新型綠色提取技術(shù)應(yīng)運而生，無有機溶劑殘留的同時，更不易破壞活性成分。華正根等采用超臨界CO2法提取靈芝三萜，在提取壓力85 MPa、提取溫度50℃、提取時間4 h的條件下，靈芝三萜含量為1.35%，得率高于傳統(tǒng)乙醇提取46.74%。為了提高三萜得率，可采用超高壓、超聲波、微波、復(fù)合酶等輔助提取。徐樹來等采用超高壓輔助乙醇提取東北赤芝三萜，在料液比為1∶20、壓力350 MPa、保壓時間7 min、乙醇體積分數(shù)為90%的條件下，三萜得率為1.154%。丁霄霄等用復(fù)合酶輔助無水乙醇80℃水浴2 h提取靈芝三萜，得率約為1.29%；Chen等發(fā)現(xiàn)微波輔助提取靈芝三萜得率高于傳統(tǒng)提取法、超臨界CO2提取法和超聲輔助提取法，可達5.11%。基于靈芝三萜具有醇溶性、弱酸性等特性，主要采用高效液相色譜、高速逆流色譜、打孔吸附樹脂色譜、柱層析等色譜法進行分離純化。梁銳等以0.01%的乙腈-乙酸水溶液為流動相梯度，流速為1.0 mL/min，柱溫30℃洗脫靈芝水提物，在波長252 nm的條件下可以檢驗到不同的靈芝酸單體；錢竹用大孔吸附樹脂色譜吸附靈芝發(fā)酵液，獲得純化的靈芝酸。
3.甾醇類
甾醇類物質(zhì)是靈芝的重要次生代謝產(chǎn)物，包括靈芝甾醇、羊毛甾醇類化合物、麥角甾醇及其衍生物等20余種甾醇，具有保肝、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、修復(fù)腦損傷等作用。靈芝甾醇主要以游離態(tài)和甾醇酯的形式存在，含量一般借助紫外分光光度法和HPLC法測定，提取多采用超聲提取法、溶劑提取法和溶劑回流提取法。賈碩得出黑芝的最佳工藝是乙醇體積分數(shù)100%、溫度76.3℃、浸提4 h。張萱優(yōu)化赤芝子實體麥角甾醇提取工藝發(fā)現(xiàn)，回流次數(shù)是最主要影響因素，其次是回流時間和溶劑用量。申明月借助高速逆流色譜法，以正己烷-乙醇-水（6∶5∶1）為固定相，甲醇為流動相，在流速為1.8 mL/min、轉(zhuǎn)速850 r/min、溫度25℃的條件下從黑芝中分離純化出麥角甾-4，6，8（14），22-四烯-3。肖叢梅采用雙水相分離提取法，在8.7%碳酸鉀（w/v）、27.5%正丙醇（w/v）、超聲30 min的條件下實現(xiàn)甾醇與三萜一步式分離，經(jīng)層析柱純化后獲得麥角甾醇和過氧麥角甾醇。
4.氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類
靈芝富含谷氨酸、賴氨酸、亮氨酸等必需氨基酸，不同品種和同一品種不同部位所含氨基酸比例不同，其含量可通過離子色譜檢測法檢測。靈芝粗蛋白含量7.9%~11.83%，包括真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（Fungal immunomodulation protein，F(xiàn)IP）、凝集素、糖蛋白、酶等，具有免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用。其中FIP是主要的活性蛋白，最早從靈芝中分離鑒定獲得的lingzhi-8（LZ-8），具有抗腫瘤和免疫排斥、預(yù)防和逆轉(zhuǎn)骨質(zhì)疏松等功效。靈芝蛋白的制備主要通過熱水浸提法、堿浸提法、超聲提取法、微波提取法等提取濃縮蛋白，再經(jīng)過酶解等技術(shù)制備多肽。石燕玲等采用超濾系統(tǒng)對靈芝水提物進行分離，膜透過物脫色后采用Cu2+-Sephadex G-25配位色譜法收集肽級分，經(jīng)過螯合樹脂柱脫銅、大孔樹脂脫鹽獲得靈芝粗肽。除了傳統(tǒng)方法提取純化獲取FIP外，也可借助大腸桿菌或酵母等體系高效表達制備FIP。
5.其他活性成分
靈芝中含有少量生物堿，主要是膽堿、甜菜堿、靈芝堿（靈芝堿甲、靈芝堿乙）等。研究表明，生物堿能顯著降低膽固醇、降血脂，改善心血管疾病等。此外靈芝還含有其他活性成分，如酚類物質(zhì)、脂肪酸（苯甲酸、硬脂酸等）、維生素、微量元素（Mn、Ca、Fe、Zn、Ni等）等，具有改善炎癥、高血脂等作用。（來源：菌物研究，作者：曾婷 黃文琪 趙立娜 劉斌）
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