靈芝的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性成分十分豐富，主要活性成分有多糖、三萜類化合物、蛋白質(zhì)、多肽、核苷類、呋喃類、甾醇、生物堿和氨基酸等。多糖、三萜類化合物和蛋白質(zhì)是靈芝的主要活性成分，靈芝多糖和肽又多以蛋白多糖或糖肽的形式存在。研究表明，靈芝主要活性物質(zhì)具有抗氧化、抗糖尿病、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、降低膽固醇、保肝護(hù)腎等活性。
1.多糖類
多糖是靈芝研究最多的活性成分之一，目前已分離出200多種靈芝多糖，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)特性。多糖主要存在于細(xì)胞壁中，易溶于水難溶于有機(jī)溶劑，常見(jiàn)提取方法有熱水浸提法、堿浸提法、超聲提取法、微波提取法、酶解法等。胡瑞財(cái)?shù)仍诹弦罕?∶34.5、84.6℃的條件下浸提林下栽培的靈芝子實(shí)體68.3 min，多糖得率可達(dá)1.88%。王會(huì)賓等用熱水浸提法提取靈芝孢子多糖，響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果表明，在料液比1∶15.8、91℃浸提3.3 h的條件下，多糖得率可達(dá)3.69%。Huang 等經(jīng)過(guò)優(yōu)化確定堿性提取靈芝子實(shí)體多糖的最佳工藝，料液比為1∶21.4、5.1%的NaOH溶液、60.1℃提取77.3 min，總多糖得率8.21%。Ma等采用超聲提取靈芝子實(shí)體多糖，最佳提取條件為超聲功率320 W、溫度70℃、時(shí)間34 min，此時(shí)多糖得率為2.78%。胡靈等采用微波法提取靈芝多糖，結(jié)果表明最佳提取條件為料液比1∶20、提取溫度為90℃、提取功率為400 W、提取時(shí)間為20 min，多糖得率達(dá)1.15%。Do等采用超聲輔助幾丁質(zhì)酶提取越南赤芝子實(shí)體，結(jié)果表明酶濃度為32%、pH值為8.3、提取溫度為5℃、提取時(shí)間為5 min、超聲功率為45 W等最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù)下，提取液多糖含量可達(dá)30.48 mg/g。靈芝粗多糖常混有蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、色素等雜質(zhì)，需要選擇合適的方法將多糖與雜質(zhì)分離，以得到純凈的多糖組分。常見(jiàn)純化方法有乙醇分級(jí)沉淀法、超濾膜分離法、親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析等。多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，靈芝品系和純化方法的差異會(huì)導(dǎo)致純化得到的靈芝多糖的結(jié)構(gòu)存在差異。劉艷芳等采用乙醇沉淀和柱層析法，從靈芝子實(shí)體和孢子粉中分離純化得到2種免疫活性不同的β-葡聚糖。Pan等用DEAE-52纖維素柱層析對(duì)靈芝多糖FYGL進(jìn)行梯度洗脫，得到分子質(zhì)量為78 ku的中性多糖FYGL-1，主要成分為半乳糖、鼠李糖和葡萄糖。Huang等采用凝膠過(guò)濾層析法分離得到由葡萄糖和半乳糖組成的水溶性中性多糖GLP-F1-500。何晉浙等采用沸水回流法提取靈芝子實(shí)體多糖，發(fā)現(xiàn)經(jīng)膜分離得到的100 ku以上的多糖為β-葡聚糖。
2.三萜類
三萜是靈芝另一類主要生物活性成分，其含量可以作為評(píng)估靈芝質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，主要包括靈芝酸、赤芝酸、靈芝內(nèi)酯等三萜類化合物，具有抗炎、抗腫瘤、抗HIV和降血脂活性。迄今為止，已經(jīng)從靈芝子實(shí)體、孢子和菌絲體中鑒定出200余種三萜類化合物。靈芝三萜多具有脂溶性，易溶于有機(jī)試劑難溶于水。提取方法主要有傳統(tǒng)溶劑提取法、超臨界萃取法、酶解法等。傳統(tǒng)提取法操作簡(jiǎn)單，多采用醇、氯仿等有機(jī)試劑在適宜溫度下提取，存在耗時(shí)長(zhǎng)、提取率低、有機(jī)溶劑殘留等缺點(diǎn)。超臨界CO2法作為新型綠色提取技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，無(wú)有機(jī)溶劑殘留的同時(shí)，更不易破壞活性成分。華正根等采用超臨界CO2法提取靈芝三萜，在提取壓力85 MPa、提取溫度50℃、提取時(shí)間4 h的條件下，靈芝三萜含量為1.35%，得率高于傳統(tǒng)乙醇提取46.74%。為了提高三萜得率，可采用超高壓、超聲波、微波、復(fù)合酶等輔助提取。徐樹(shù)來(lái)等采用超高壓輔助乙醇提取東北赤芝三萜，在料液比為1∶20、壓力350 MPa、保壓時(shí)間7 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%的條件下，三萜得率為1.154%。丁霄霄等用復(fù)合酶輔助無(wú)水乙醇80℃水浴2 h提取靈芝三萜，得率約為1.29%；Chen等發(fā)現(xiàn)微波輔助提取靈芝三萜得率高于傳統(tǒng)提取法、超臨界CO2提取法和超聲輔助提取法，可達(dá)5.11%。基于靈芝三萜具有醇溶性、弱酸性等特性，主要采用高效液相色譜、高速逆流色譜、打孔吸附樹(shù)脂色譜、柱層析等色譜法進(jìn)行分離純化。梁銳等以0.01%的乙腈-乙酸水溶液為流動(dòng)相梯度，流速為1.0 mL/min，柱溫30℃洗脫靈芝水提物，在波長(zhǎng)252 nm的條件下可以檢驗(yàn)到不同的靈芝酸單體；錢竹用大孔吸附樹(shù)脂色譜吸附靈芝發(fā)酵液，獲得純化的靈芝酸。
3.甾醇類
甾醇類物質(zhì)是靈芝的重要次生代謝產(chǎn)物，包括靈芝甾醇、羊毛甾醇類化合物、麥角甾醇及其衍生物等20余種甾醇，具有保肝、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、修復(fù)腦損傷等作用。靈芝甾醇主要以游離態(tài)和甾醇酯的形式存在，含量一般借助紫外分光光度法和HPLC法測(cè)定，提取多采用超聲提取法、溶劑提取法和溶劑回流提取法。賈碩得出黑芝的最佳工藝是乙醇體積分?jǐn)?shù)100%、溫度76.3℃、浸提4 h。張萱優(yōu)化赤芝子實(shí)體麥角甾醇提取工藝發(fā)現(xiàn)，回流次數(shù)是最主要影響因素，其次是回流時(shí)間和溶劑用量。申明月借助高速逆流色譜法，以正己烷-乙醇-水（6∶5∶1）為固定相，甲醇為流動(dòng)相，在流速為1.8 mL/min、轉(zhuǎn)速850 r/min、溫度25℃的條件下從黑芝中分離純化出麥角甾-4，6，8（14），22-四烯-3。肖叢梅采用雙水相分離提取法，在8.7%碳酸鉀（w/v）、27.5%正丙醇（w/v）、超聲30 min的條件下實(shí)現(xiàn)甾醇與三萜一步式分離，經(jīng)層析柱純化后獲得麥角甾醇和過(guò)氧麥角甾醇。
4.氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類
靈芝富含谷氨酸、賴氨酸、亮氨酸等必需氨基酸，不同品種和同一品種不同部位所含氨基酸比例不同，其含量可通過(guò)離子色譜檢測(cè)法檢測(cè)。靈芝粗蛋白含量7.9%~11.83%，包括真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（Fungal immunomodulation protein，F(xiàn)IP）、凝集素、糖蛋白、酶等，具有免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗腫瘤、抗病毒等藥理作用。其中FIP是主要的活性蛋白，最早從靈芝中分離鑒定獲得的lingzhi-8（LZ-8），具有抗腫瘤和免疫排斥、預(yù)防和逆轉(zhuǎn)骨質(zhì)疏松等功效。靈芝蛋白的制備主要通過(guò)熱水浸提法、堿浸提法、超聲提取法、微波提取法等提取濃縮蛋白，再經(jīng)過(guò)酶解等技術(shù)制備多肽。石燕玲等采用超濾系統(tǒng)對(duì)靈芝水提物進(jìn)行分離，膜透過(guò)物脫色后采用Cu2+-Sephadex G-25配位色譜法收集肽級(jí)分，經(jīng)過(guò)螯合樹(shù)脂柱脫銅、大孔樹(shù)脂脫鹽獲得靈芝粗肽。除了傳統(tǒng)方法提取純化獲取FIP外，也可借助大腸桿菌或酵母等體系高效表達(dá)制備FIP。
5.其他活性成分
靈芝中含有少量生物堿，主要是膽堿、甜菜堿、靈芝堿（靈芝堿甲、靈芝堿乙）等。研究表明，生物堿能顯著降低膽固醇、降血脂，改善心血管疾病等。此外靈芝還含有其他活性成分，如酚類物質(zhì)、脂肪酸（苯甲酸、硬脂酸等）、維生素、微量元素（Mn、Ca、Fe、Zn、Ni等）等，具有改善炎癥、高血脂等作用。（來(lái)源：菌物研究，作者：曾婷 黃文琪 趙立娜 劉斌）
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